Лабораторная диагностика гриппа и орви

Лабораторная диагностика гриппа и орви

Лабораторная дифференциальная диагностика гриппа и ОРВИ

Амосова И. В., к.б.н., вед. научный сотрудник, Тимошичева Т.А., м.н.с.

Лаборатория биотехнологии диагностических препаратов ФГБУ “НИИ гриппа” Минздрава России, г. Санкт-Петербург

В России ежегодно регистрируется около 50 миллионов случаев инфекционных заболеваний. До 95% из них приходится на острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ), включая грипп [1]. Помимо вирусов гриппа в структуре заболеваемости ОРВИ достаточно высока роль возбудителей иной этиологии, среди которых более чем в 20% случаев выявляются респираторно-синцитиальный вирус (РСВ), вирусы парагриппа и аденовирусы. Респираторные вирусы являются причиной 20% нозокомиальных пневмоний [2]. Экономический ущерб от ОРВИ можно сравнить лишь с затратами на профилактику и лечение длительно текущих сердечно-сосудистых и онкологических заболеваний.

В связи с этим, ВОЗ разработала программу мониторинга и эпиднадзора за гриппом (Глобальная система надзора за гриппом), а также критерии для оценки эффективности диагностических тестов – это должны быть доступные, чувствительные, специфичные тесты, удобные для пользователя, быстродействующие и надежные, не требующие дорогостоящего оборудования [3, 4]. Эффективная профилактика и лечение инфекционных заболеваний также тесно связаны с ранним и точным выявлением патогена не только путем обнаружения инфекционных частиц в организме, но и путем определения профиля иммунного ответа и аспектов, которые придают устойчивость к терапии.

Применение современных гриппозных вакцин является одним из эффективных, безопасных и экономически оправданных способов профилактики гриппа среди населения. Своевременная вакцинация позволяет снизить заболеваемость гриппом в 1,4–1,7, уменьшает тяжесть болезни, предупреждает развитие тяжелых осложнений и летальных исходов [5].

Вакцинация против гриппа наиболее эффективна в случаях, когда циркулирующие вирусы соответствуют вирусам, содержащимся в вакцине. В связи с постоянным изменением вирусов гриппа сеть национальных центров по гриппу и сотрудничающих центров ВОЗ во всем мире ведут постоянный мониторинг вирусов гриппа, циркулирующих среди людей, и два раза в год обновляют состав противогриппозных вакцин. Эффективность гриппозных вакцин принято оценивать по приросту уровня специфических антител к гемагглютинину вирусов гриппа в парных сыворотках привитых лиц в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), которая основана на способности специфических антител ингибировать агглютинацию эритроцитов вирусами гриппа (Рис. 1).

Уровень антител к гемагглютинину напрямую коррелирует с уровнем защищенности. При оценке потенциальной эффективности вакцины титр антител не менее чем 1:40 считают защитным [6]. Для контроля вакцин, выбора оптимальной композиции, дозы и кратности вакцинации используют гриппозные диагностикумы для РТГА. В основу производства “Диагностикумов гриппозных для реакции торможения гемагглютинации сухих” (ДИГ) и “Сыворотки диагностической гриппозной для реакции торможения гемагглютинации сухой” (СДГ) положены многолетние научные разработки лаборатории биотехнологии диагностических препаратов ФГБУ “НИИ гриппа” МЗ РФ, который является одним из учредителей ООО “Предприятие по производству диагностических препаратов” (ООО “ППДП”).

В эпидемиологической практике ДИГ применяются для субтиповой серодиагностики гриппа (по 4-х кратному приросту титров антител в сыворотках реконвалесцентов) при расшифровке природы эпидемических вспышек. Систематическое проведение таких исследований позволяет определить стадию эпидемического процесса и соответствующую тактику проведения противоэпидемических мероприятий. СДГ используются для идентификации типов и субтипов вирусов гриппа А и В, выделенных из материалов от больных, изучения антигенной структуры вирусного гемагглютинина, контроля специфичности штаммов вирусов гриппа, входящих в состав вакцин.

Дифференциальная диагностика гриппа от ОРВИ необходима для осуществления эпидемиологического надзора за заболеваемостью и назначения своевременной противовирусной терапии, поскольку некоторые противовирусные препараты эффективны только на ранних стадиях инфекции. Понимание истинной причины заболевания также помогает избежать ненужного использования антибиотиков, которые часто назначают пациентам, инфицированным респираторными вирусами, и позволяет клиницистам прогнозировать возможные осложнения и иммунопатологические явления, которые могут возникнуть при этих инфекциях, а также выявить группы риска.

ВОЗ рекомендует использовать для идентификации возбудителей острых респираторных вирусных инфекций метод флуоресцирующих антител (МФА) наряду с выделением вирусов в культуре клеток или полимеразной цепной реакцией [7]. МФА для определения вирусных антигенов отличается простотой, скоростью, низкой стоимостью и не уступает по чувствительности и специфичности современным вариантам иммуноферментного анализа [8] и наиболее эффективен в острой фазе (первые три дня) заболевания. Его результативность существенно зависит от правильности получения клинических материалов, скорости и условий доставки в лабораторию, а также качества используемых реагентов [9].

Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие сухие, выпускаемые ООО “ППДП”, предназначены для быстрой (в течение 1,5–2-х часов) детекции вирусных антигенов в клинических материалах (мазки из носа, взятые от больных ОРВИ, содержащие клетки цилиндрического эпителия слизистой оболочки глубоких отделов носовой полости) или в клеточных культурах, инфицированных материалами от больных. Выпускаются препараты для ранней иммунофлуоресцентной диагностики вирусов гриппа А или В; аденовирусов или РСВ, вирусов парагриппа 1, 2 или 3 типа, вирусов герпеса 1 или 2 типов (Рис. 2).

ООО “ППДП” постоянно повышает качество выпускаемой продукции за счет перехода от использования поликлональных сывороток к специфичным и чувствительным моноклональным антителам. Использование при конструировании диагностических тест-систем моноклональных антител обеспечивает высокую чувствительность и специфичность анализа, необходимый уровень стандартизации препаратов, а также существенно облегчает интерпретацию результатов анализа.

Для выявления прироста антител в сыворотках реконвалесцентов, оценки коллективного иммунитета, оценки иммуногенности гриппозных вакцин, а также в научных исследованиях широко используются иммуно-ферментные тест-системы для определения прироста уровня специфических антител класса IgG (ИФТС) к вирусам гриппа А (H1N1)pdm 09, А (H3N2), вирусам гриппа B обеих генетических линий (Викторианская и Ямагатская), аденовирусам, РСВ, вирусам парагриппа 1 и 3 типов в сыворотках людей, переболевших ОРВИ. Материалом для исследования служат парные сыворотки крови от больных ОРВИ, взятые в первые 5 дней болезни и через 14–30 суток от начала заболевания.

ИФТС представляет собой 13-компонентный набор, основными реагентами которого являются очищенные вирусные антигены, позитивные и негативные контрольные образцы сывороток, а также конъюгаты моноклональных антител к IgG человека.

Характерными особенностями ИФТС производства ООО “ППДП” являются:

• высокая чувствительность анализа;

• возможность использования микроколичеств сывороток (0,5–1 мкл);

• снижение трудоемкости анализа за счет исключения операций титрования сывороток;

• возможность индикации класс-специфических противовирусных антител;

• сокращение сроков проведения анализов.

ООО “ППДП” создано в целях обеспечения нужд практического здравоохранения современными эффективными препаратами для диагностики гриппа и других ОРВИ. Препараты готовятся по оригинальным технологиям с использованием актуальных штаммов вирусов гриппа в соответствии с рекомендациями ВОЗ. Они безопасны в работе, т. к. не содержат инфекционного вируса. Лиофильно высушенные препараты длительно сохраняют свои диагностические свойства. ООО “ППДП” является отечественным производителем всего необходимого ассортимента иммунодиагностических препаратов, необходимых для надзора за гриппом и ОРВИ на территории России в рамках Глобальной системы надзора за гриппом ВОЗ.

Вся продукция производства ООО “ППДП” зарегистрирована в Федеральной службе по надзору в сфере здравоохранения (Росздравнадзоре) и допущена к обращению на территории РФ:

В 2016 г. ООО “ППДП” стала лауреатом Регионального конкурса “Лучший товар года”, в 2018 г. – лауреатом Национального экономического рейтинга в номинации “Лучшая компания России — 2018”.

Иммуноглобулины диагностические
флуоресцирующие гриппозные сухие

РУ № ФСР 2009/05255
от 09.07.2009 г.

Иммуноглобулин диагностический
флуоресцирующий аденовирусный
антигексоновый сухой

РУ № ФСР 2008/03940

Иммуноглобулины диагностические
флуоресцирующие парагриппозные сухие

РУ № ФСР 2009/05254

Иммуноглобулины диагностические
флуоресцирующие РС-вирусные сухие

РУ № ФСР 2009/05256

Диагностикумы гриппозные для реакции торможения гемагглютинации сухие

РУ № ФСР 2009/05253

Сыворотка диагностическая гриппозная для реакции торможения гемагглютинации сухая

РУ № ФСР 2009/05257

1. Карпова Л. С., Пелих М. Ю., Столяров К. А. и др. Пандемия гриппа в России как часть глобального распространения гриппа A (H1N1)pdm09 в 2009–2011 гг. Вопросы вирусологии. 2012, 57(6), 26-30.

2. Walter J. M., Wunderink R. G. Severe Respiratory Viral Infections: New Evidence and Changing Paradigms. Infect. Dis. Clin. North Am. 2017, 31(3): 455-74.

3. Blacksell S. D. Commercial dengue rapid diagnostic tests for point-of-care application: recent evaluations and future needs? J. Biomed. Biotechnol. 2012, 2012, 151967.

4. Wu G., Zaman M. H. Low-cost tools for diagnosing and monitoring HIV infection in low-resource settings. Bull. World Health Organ. 2012, 90(12), 914-20.

5. Грипп: эпидемиология, диагностика, лечение и профилактика / Под ред. акад. РАМН проф. О. И. Киселева, д-ра мед. Наук Л. М. Цыбаловой, акад. РАМН проф. В. И. Покровского. – М.: ООО “Издательство “Медицинское информационное агентство”, 2012. – 496 с.

6. Войцеховская Е. М., Вакин В. С., Васильева А. А. и др. Иммуногенность новой гриппозной вакцины. Лечащий врач. 2009; 10: 77-79.

7. WHO Global influenza surveillance Network. Manual for the laboratory diagnosis and virological surveillance of influenza. Geneva: World Health Organization; 2011. 139 p.

8. Spencer K. Recombinant viral proteins for use in diagnostic ELISAs to detect virus infection. Vaccine. 2007, 25, 5653-9.

Лабораторная диагностика гриппа и других ОРВИ методом полимеразной цепной реакции

Область применения

Настоящие клинические рекомендации устанавливают единые требования к выполнению лабораторной диагностики гриппа и других ОРВИ методом полимеразной цепной реакции для медицинских организаций Российской Федерации, имеющих лицензию по специальностям «Клиническая лабораторная диагностика», «Вирусология», «Бактериология», «Инфекционные болезни», «Педиатрия», «Пульмонология». Рекомендации одобренына II Российском конгрессе лабораторной медицины в городе Москве 14 октября 2016 года.

Читать еще:  Крем от трещин на губах

Уровень доказательности рекомендаций

Доказательной базой для рекомендаций явились публикации, вошедшие в базы данных Cochrane library, PubMed, EMBASE и MEDLINE, электронную библиотеку (www.e-library.ru). Глубина поиска составила 16 лет.

Клинические рекомендации созданы на основе согласованного мнения членов ассоциации специалистов и организаций лабораторной службы «Федерация лабораторной медицины», а также обобщения опыта авторов, специалистов обществ пульмонологов России (Российское Респираторное Общество) и стран Европы (Европейское Респираторное Общество) и апробированных рекомендаций, действующих в настоящее время в Великобритании [Harris M; Lim WS] США [Bartlett JG; Mandell LA], Швеции [Regamey N].

Оценка уровня доказательности и значимости рекомендаций производилась в соответствии с данными, изложенными ниже.

Оценка уровня доказательности

Качество доказательности рекомендации

Уровни доказательности рекомендаций приводятся при изложении текста ниже.

Общие положения и область применения

В методических рекомендациях представленысовременныесведения о возбудителях ОРВИ, включая эпидемиологические данные о новых видахвирусов, описанных в последнее десятилетие. Представленобщий методический подход и подробный порядокпроведения лабораторного исследования методом ПЦРс целью обнаружения НК гриппа и других значимых возбудителей ОРВИ. Особое внимание уделено описанию перечня биологического материалаи правил его получения, упаковки, транспортирования и хранения биологическогоматериала от больных (умерших).

Клинические рекомендации предназначены для специалистов лабораторий, выполняющих работы c использованием методов амплификации НК при исследовании материала, содержащего (подозрительного на содержание) микроорганизмы I-IV групп патогенности (опасности), аккредитованных в установленном порядке и имеющих лицензии на данный вид деятельности в соответствии с законодательством Российской Федерации.

Заболеваемость острыми инфекциями верхних дыхательных путей (ОРВИ) множественной или неуточненной локализации и гриппом в России по данным официальной статистики (форма 1) в совокупности составляет 19-20 тыс. на 100 тыс. населения ежегодно, превышая в десятки раз аналогичные показатели для других инфекционных болезней, и составляет 90% всех регистрируемых случаев инфекционных и паразитарных болезней. Дети дошкольного возраста подвержены острым респираторным заболеваниям (ОРЗ), в среднем, 4-8 раз в год, школьники от 2 до 6 раз в год, взрослые 2-3 раза в год. В контингентах часто болеющих детей эпизоды ОРЗ регистрируются от 10 до 12 раз в год.

В 90% случаев ОРЗ вызывают возбудители ОРВИ, причиной которых могут являться представители 4-х семейств вирусов, геном которых представлен молекулой РНК (ортомиксовирусы, парамиксовирусы, коронавирусы и пикорнавирусы) и 2-х семейств вирусов, геном которых представлен молекулой ДНК (аденовирусы, парвовирусы). Ведущее место среди острых инфекций дыхательных путей занимает грипп, возбудитель которого периодически вызывает пандемии, последняя из которых наблюдалась в 2009-2010 гг. Эпидемии гриппа охватывают от 5 до 20% населения, приводят к госпитализации порядка 3 млн. человек и вызывают до 250-500 тыс. летальных исходов в мире ежегодно [CDC. MMWR, 2010]. У взрослых больных гриппом в 10-15% случаев развиваются осложнения, причем80% из них приходится на пневмонию. При развитии пневмонии у детей вирусы гриппа обнаруживают в 7-22% случаев. Возбудители гриппа относятся к семейству Orthomyxoviridae, в котором выделяют три рода -InfluenzavirusA, InfluenzavirusВи InfluenzavirusС, каждый из которых имеет по одному виду — InfluenzaAvirus, InfluenzaВ virusи InfluenzaС virus.

Вирусы гриппа А (Influenzavirus A), широко распространены в природе, их выделяют от большинства зверей и птиц, и по этой причине, они имеют высокий пандемический потенциал, так как способны преодолевать межвидовые барьеры. Способность вирусов гриппа А к быстрому накоплению мутаций, изменяющих их антигенные свойства, лежит в основе их высокого эпидемического потенциала. Вирусы гриппа А в настоящее время дифференцируют (типируют) с помощью генетических методов на подтипы (или субтипы) в соответствии с генетической структурой генов гемагглютинина (HА) на 16 субтипов и нейраминидазы (NА) на 9 субтипов. В 2013г.при скрининге у летучих мышей в Центральной Америке и Перу 2013г.были обнаружены новые субтипы 11 вирусов гриппа, обозначенные как H17N10 и H18N11. Значительную обеспокоенность вызывает циркуляция в природе патогенных для человека вирусов гриппа птиц. Регистрируются крупные эпизоотии,вызванные вирусами гриппа субтипов H7 и H9, сопровождаемые заболеванием людей (Гонконг –H9N2, 1998-1999 гг., Нидерланды-H7N7, 2003г.), в ряде случаев с летальным исходом. С 2005 г. эпизоотии гриппа H5N1, повлекли за собой заболевания людей в десятке стран мира с летальностью 60%. В июне 2013г. ВОЗ сообщила о 132 лабораторно-подтвержденных случаях инфекции, вызванной вирусом гриппа A/H7N9, включая 37 случаев, закончившихся летально. Таким образом, на настоящее время актуален мониторинг вирусов гриппа, имеющих в геноме сегмент, кодирующий НА субтипов H5, H7 и H9.

Вирусы гриппа В до сих пор выделяли только от людей. Наряду с гриппом А, они занимают значительную долю в структуре летальности при гриппе у детей. Так, в США в сезоне 2010-2011гг.вирус гриппа В стал причиной 38% случаев смерти детей, заняв в структуре циркулирующих вирусов гриппа 26% [CDC. MMWR., 2011].

У людей вирусы гриппа С вызывают спорадические ОРЗ. Среди животных вирусы гриппа С выделяют от свиней, при экспериментальном заражении заболеванию подвержены собаки. Вирусы гриппа А, В и С дифференцируют друг от друга с помощью иммунологических и МАНК.

Помимо гриппа, причиной ОРЗ являются парамиксовирусы: респираторно-синцитиальный вирус (HumanRespiratorysyncytialvirus), метапневмовирус человека (HumanMetapneumovirus), 4 вида (1-4) вирусов парагриппа (Human Parainfluenza virus1-4), коронавирусы (Human Coronavirus 229E, Human CoronavirusOC43, Human CoronavirusNL63, Human CoronavirusHKUI), риновирусы (Rhinovirus) виды А, В, С, относящиеся к пикорнавирусам, аденовирусы (Human mastadenovirus) виды B, C, E, бокавирус человека (Human bocavirus), относящийся к парвовирусам. Все вышеперечисленные вирусы вызывают ОРЗ среди всех возрастных групп, за исключением бокавируса человека, инфицирующего только детей. У лиц со сниженной активностью иммунной системы, причиной ОРЗ могут быть также энтеровирусы, вирусы герпеса, цитомегаловирус. Дифференциальная диагностика гриппа и других ОРВИ возможна только с помощью лабораторных методов исследования.

Респираторно-синцитиальный вирус (hRSv, РС-вирус) является основным возбудителем бронхиолитов и пневмоний у младенцев и детей младшего возраста во всем мире [Nair H; Stockman LJ]. Частота hRSv у больных внебольничной пневмонии детей колеблется от 15,7% до 31,8% в зависимости от региона эпидемического сезона и возраста и максимальна у госпитализированных детей первого года жизни [Rohde GGU; Harris M]. В группу риска тяжелого течения PC-инфекциивходят недоношенные младенцы, дети до 2-х лет, дети и взрослые с ослабленной вследствие заболеваний или лечения иммунной системой, пожилые люди (старше 65 лет). В годы эпидемической активности hRSv составляет 44% в этиологической структуре острых бронхитов у госпитализированных детей [Яцышина С.Б., 2008].

Клинико-эпидемиологические исследования инфекции, вызванной метапневмовирусом (hMPv), впервые обнаруженным в 2001г., демонстрируют сходство клинической картины с RSv-инфекцией. Исследования специфических антител к вирусу в разных популяциях свидетельствуют о широкой распространенности hMPv, практически все дети имеют такие АТ к 5 годам жизни. MPv-инфекция составляет от 5 до 25% случаев госпитализаций с острой инфекцией нижних дыхательных путей детей младшего возраста [Edwards KM]. Основными диагнозами hMPv-инфекции у детей являются бронхиолиты, пневмония и бронхиальная астма. У детей при пневмонии метапневмовирус обнаруживают в 8-14,5% случаев [Williams JV, 2010; Rohde GGU]. hMPv, как и hRSv, могут служить причиной групповых заболеваний в домах малютки и домах престарелых, вызывая заболевания нижних дыхательных путей (до 79%) и приводя к летальным исходам (до 11%) [CDC. MMWR. 2013].

Вирусы парагриппа (hPiv) разделяют на 4 вида, относящиеся к двум родам: респировирусы (парагрипп 1 и 3) и рубулавирусы (парагрипп 2 и 4). Вирусы парагриппа часто обнаруживаются у детей младшего возраста. Ко второму году жизни каждый ребенок хотя бы один раз переболевает ОРЗ, вызванным вирусами парагриппа. hPiv 2 и 4 чаще обнаруживают у детей первого года жизни по сравнению с другими возрастными группами, где превалируют вирусы парагриппа 1 и 3. Доля hPiv в этиологической структуре ОРЗ составляет от 9 до 30%. При этом, в этиологической структуре крупов у детей первых лет жизни вирусы парагриппа 1 –4 занимают до 20%. Среди детей с заболеваниями нижних дыхательных путей, госпитализированных в стационары, инфицированные hPiv,составляют около 22% [Weinberg GA]. Все это ставит вирусы парагриппа на второе место среди возбудителей ОРВИ по частоте госпитализации и тяжести заболевания после респираторно-синцитиального вируса.

Среди аденовирусов (hAdv) выделяют 7 видов: A, B, C, D, E, F, G. В зависимости от вида,аденовирусы вызывают различные инфекционные заболевания: конъюнктивиты и кератоконъюнктивиты (A, D), острые диарейные заболевания (F), гастроэнтериты (G), крупы, гриппоподобные заболевания, бронхиты и пневмонии – B, C, E. Известны случаи бессимптомного носительства hAdv в лимфоидной ткани верхних дыхательных путей на протяжении нескольких месяцев и лет, которые могут быть источником возбудителя. Будучи относительно устойчивыми к химическим и физическим воздействиям, hAdv могут длительное время сохранять стабильность в окружающей среде, и по этой причине,часто вызывают вспышки в детских дошкольных учреждения, домах ребенка, домах престарелых, и прежде всего, в воинских частях, где частота выявления hAdv достоверно превышает таковую у взрослых штатских и детей [Львов Н.И.]. При этом заболевание может протекать со случаями пневмонии тяжелого течения, и даже заканчиваться летальным исходом [Яцышина С.Б., 2014].

Коронавирусы (hCov) представляют собой большую разнообразную группу вирусов, которая классифицируется как альфа, бета и гамма коронавирусы. Различные виды коронавирусов широко распространены в природе, вызывая различную инфекционную патологию у животных: гастроэнтериты и респираторные инфекции у свиней, инфекционный бронхит кур, энтериты у собак, инфекционный перитонит у кошек. Как показали исследования последних двух лет, летучие мыши инфицированы разнообразными альфа-и бета-коронавирусами. У человека острую респираторную инфекцию вызывают 4 вида коронавирусов: 229E, OC43, NL63, HKUI, чаще протекающую с поражением верхних дыхательных путей легкой или средней тяжести [Bradburne AF], и в редких случаях – с инфекциями нижних дыхательных путей [Woo PC]. Коронавирусы обнаруживаются преимущественно у детей младшего возраста с симптоматикой крупа иларингита [vander HoekL]. У детей старшего возраста и у взрослых при коронавирусной инфекции может отмечаться гриппо-подобная симптоматика, а также кашель и ринорея.

Читать еще:  Лимфатические узлы в легких

В настоящее время семейство коронавирусов включает 2 вида вирусов, вызывающих тяжелую респираторную инфекцию у людей: SARS-Cov (Severe acute respiratory syndrome coronavirus, или ТОРС-коронавирус, вызывающий тяжелый острый респираторный синдром) и MERS-Cov (Middle East respiratory syndrome coronavirus, или БВРС-коронавирус, вызывающий Ближневосточный респираторный синдром). Коронавирус ТОРС вызвал эпидемию в 2003 году в 33 странах мира (наибольшее количество заболевших было зарегистрировано в Китае, Сингапуре и Канаде), с общим числом заболевших 7761 человек, у 623 из них заболевание закончилось летальным исходом [Memish ZA]. Вирус SARS-Cov легко передается от человека к человеку. С сентября 2012 г. на Ближнем Востоке регистрируются случаи новой инфекции, вызванные коронавирусом MERS-Cov, летальность по данным ВОЗ составляет порядка 43%. Предполагают, что инфицирование людей происходит при контакте с верблюдами или с контаминированными вирусом объектами окружающей среды в домашнем хозяйстве или при посещении животноводческих ферм. Подтверждена возможность передачи MERS-Covот человека к человеку при близком и длительном контакте, что может провоцировать вспышки внутрибольничной инфекции в человеческой популяции [Assiri AD]. Природным резервуаром обоих вирусов являются летучие мыши.

Самым распространенным возбудителем ОРВИ среди взрослого населения и детей всех возрастных групп являются риновирусы (hRv), вызывающие воспаление слизистой верхних дыхательных путей с ринореей и кашлем; в качестве осложнения нередко развивается трахеит. Среди Rv в настоящее время выделяют 3 вида вирусов: А, В, C. Принимая во внимание тот факт, что риновирусы достаточно часто обнаруживают у детей при пневмонии [Kieninger E; Яцышина С.Б., 2016], и экспериментально доказана возможность репликации риновирусов в ткани легких млекопитающих [Schroth MK], нельзя недооценивать данный возбудитель как причину поражения нижних дыхательных путей у детей.

Бокавирус (hBov), впервые описанный в 2005 г., обнаруживается со среднегодовой частотой 1,5-19% как единственный возбудитель острой инфекции дыхательных путей у детей до 5 лет [Кондратьева Т.Ю.], вызывая лихорадку, кашель, риниты и диарею [Вартанян Р.В.]. Помимо этого, бокавирус часто обнаруживается в сочетании с другими возбудителями ОРЗ. При пневмонии у детей бокавирусы обнаруживаются в 4-15% случаев [Honkinen M; Esposito S; Яцышина С.Б., 2016]. У взрослых, находящихся в тесном контакте с больными детьми, бокавирус может вызывать легкие симптомы ОРЗ [Кондратьева Т.Ю.], в редких случаях вирус обнаруживается при пневмонии на фоне иммунодефицита.

Наиболее тяжело протекают острые инфекции дыхательных путей, вызванные респираторно-синцитиальным вирусом, метапневмовирусом, вирусами парагриппа и коронавирусами, у детей в возрасте до 5 лет, пожилых и у лиц с иммунодефицитом. Современные данные свидетельствуют, что случаи инфекций нижних дыхательных путей вирусной этиологиине следует рассматривать как единичные или очень редкие. Вирусные возбудители инфекций дыхательных путей обнаруживаются у 10% пациентов ВП, нуждающихся в интенсивной терапии [Harris M].

Внедрение в клиники методов ранней этиологической лабораторной диагностики вирусных инфекций позволит клиницистам своевременно применять средства специфической противовирусной терапии, разрабатывать эффективную тактику ведения пациентовс инфекцией определенной этиологии, и тем самым, предотвращать осложнения и летальные исходы.

2. Клинические формы инфекций

2.1. Профили клинико-статистических групп заболеваний

  • Острые респираторные инфекции верхних дыхательных путей
  • Острые респираторные инфекции нижних дыхательных путей

Лабораторная диагностика гриппа и орви

Лабораторная дифференциальная диагностика гриппа и ОРВИ

Амосова И. В., к.б.н., вед. научный сотрудник, Тимошичева Т.А., м.н.с.

Лаборатория биотехнологии диагностических препаратов ФГБУ “НИИ гриппа” Минздрава России, г. Санкт-Петербург

В России ежегодно регистрируется около 50 миллионов случаев инфекционных заболеваний. До 95% из них приходится на острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ), включая грипп [1]. Помимо вирусов гриппа в структуре заболеваемости ОРВИ достаточно высока роль возбудителей иной этиологии, среди которых более чем в 20% случаев выявляются респираторно-синцитиальный вирус (РСВ), вирусы парагриппа и аденовирусы. Респираторные вирусы являются причиной 20% нозокомиальных пневмоний [2]. Экономический ущерб от ОРВИ можно сравнить лишь с затратами на профилактику и лечение длительно текущих сердечно-сосудистых и онкологических заболеваний.

В связи с этим, ВОЗ разработала программу мониторинга и эпиднадзора за гриппом (Глобальная система надзора за гриппом), а также критерии для оценки эффективности диагностических тестов – это должны быть доступные, чувствительные, специфичные тесты, удобные для пользователя, быстродействующие и надежные, не требующие дорогостоящего оборудования [3, 4]. Эффективная профилактика и лечение инфекционных заболеваний также тесно связаны с ранним и точным выявлением патогена не только путем обнаружения инфекционных частиц в организме, но и путем определения профиля иммунного ответа и аспектов, которые придают устойчивость к терапии.

Применение современных гриппозных вакцин является одним из эффективных, безопасных и экономически оправданных способов профилактики гриппа среди населения. Своевременная вакцинация позволяет снизить заболеваемость гриппом в 1,4–1,7, уменьшает тяжесть болезни, предупреждает развитие тяжелых осложнений и летальных исходов [5].

Вакцинация против гриппа наиболее эффективна в случаях, когда циркулирующие вирусы соответствуют вирусам, содержащимся в вакцине. В связи с постоянным изменением вирусов гриппа сеть национальных центров по гриппу и сотрудничающих центров ВОЗ во всем мире ведут постоянный мониторинг вирусов гриппа, циркулирующих среди людей, и два раза в год обновляют состав противогриппозных вакцин. Эффективность гриппозных вакцин принято оценивать по приросту уровня специфических антител к гемагглютинину вирусов гриппа в парных сыворотках привитых лиц в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), которая основана на способности специфических антител ингибировать агглютинацию эритроцитов вирусами гриппа (Рис. 1).

Уровень антител к гемагглютинину напрямую коррелирует с уровнем защищенности. При оценке потенциальной эффективности вакцины титр антител не менее чем 1:40 считают защитным [6]. Для контроля вакцин, выбора оптимальной композиции, дозы и кратности вакцинации используют гриппозные диагностикумы для РТГА. В основу производства “Диагностикумов гриппозных для реакции торможения гемагглютинации сухих” (ДИГ) и “Сыворотки диагностической гриппозной для реакции торможения гемагглютинации сухой” (СДГ) положены многолетние научные разработки лаборатории биотехнологии диагностических препаратов ФГБУ “НИИ гриппа” МЗ РФ, который является одним из учредителей ООО “Предприятие по производству диагностических препаратов” (ООО “ППДП”).

В эпидемиологической практике ДИГ применяются для субтиповой серодиагностики гриппа (по 4-х кратному приросту титров антител в сыворотках реконвалесцентов) при расшифровке природы эпидемических вспышек. Систематическое проведение таких исследований позволяет определить стадию эпидемического процесса и соответствующую тактику проведения противоэпидемических мероприятий. СДГ используются для идентификации типов и субтипов вирусов гриппа А и В, выделенных из материалов от больных, изучения антигенной структуры вирусного гемагглютинина, контроля специфичности штаммов вирусов гриппа, входящих в состав вакцин.

Дифференциальная диагностика гриппа от ОРВИ необходима для осуществления эпидемиологического надзора за заболеваемостью и назначения своевременной противовирусной терапии, поскольку некоторые противовирусные препараты эффективны только на ранних стадиях инфекции. Понимание истинной причины заболевания также помогает избежать ненужного использования антибиотиков, которые часто назначают пациентам, инфицированным респираторными вирусами, и позволяет клиницистам прогнозировать возможные осложнения и иммунопатологические явления, которые могут возникнуть при этих инфекциях, а также выявить группы риска.

ВОЗ рекомендует использовать для идентификации возбудителей острых респираторных вирусных инфекций метод флуоресцирующих антител (МФА) наряду с выделением вирусов в культуре клеток или полимеразной цепной реакцией [7]. МФА для определения вирусных антигенов отличается простотой, скоростью, низкой стоимостью и не уступает по чувствительности и специфичности современным вариантам иммуноферментного анализа [8] и наиболее эффективен в острой фазе (первые три дня) заболевания. Его результативность существенно зависит от правильности получения клинических материалов, скорости и условий доставки в лабораторию, а также качества используемых реагентов [9].

Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие сухие, выпускаемые ООО “ППДП”, предназначены для быстрой (в течение 1,5–2-х часов) детекции вирусных антигенов в клинических материалах (мазки из носа, взятые от больных ОРВИ, содержащие клетки цилиндрического эпителия слизистой оболочки глубоких отделов носовой полости) или в клеточных культурах, инфицированных материалами от больных. Выпускаются препараты для ранней иммунофлуоресцентной диагностики вирусов гриппа А или В; аденовирусов или РСВ, вирусов парагриппа 1, 2 или 3 типа, вирусов герпеса 1 или 2 типов (Рис. 2).

ООО “ППДП” постоянно повышает качество выпускаемой продукции за счет перехода от использования поликлональных сывороток к специфичным и чувствительным моноклональным антителам. Использование при конструировании диагностических тест-систем моноклональных антител обеспечивает высокую чувствительность и специфичность анализа, необходимый уровень стандартизации препаратов, а также существенно облегчает интерпретацию результатов анализа.

Для выявления прироста антител в сыворотках реконвалесцентов, оценки коллективного иммунитета, оценки иммуногенности гриппозных вакцин, а также в научных исследованиях широко используются иммуно-ферментные тест-системы для определения прироста уровня специфических антител класса IgG (ИФТС) к вирусам гриппа А (H1N1)pdm 09, А (H3N2), вирусам гриппа B обеих генетических линий (Викторианская и Ямагатская), аденовирусам, РСВ, вирусам парагриппа 1 и 3 типов в сыворотках людей, переболевших ОРВИ. Материалом для исследования служат парные сыворотки крови от больных ОРВИ, взятые в первые 5 дней болезни и через 14–30 суток от начала заболевания.

ИФТС представляет собой 13-компонентный набор, основными реагентами которого являются очищенные вирусные антигены, позитивные и негативные контрольные образцы сывороток, а также конъюгаты моноклональных антител к IgG человека.

Характерными особенностями ИФТС производства ООО “ППДП” являются:

• высокая чувствительность анализа;

• возможность использования микроколичеств сывороток (0,5–1 мкл);

• снижение трудоемкости анализа за счет исключения операций титрования сывороток;

Читать еще:  Конхотомия нижних носовых раковин

• возможность индикации класс-специфических противовирусных антител;

• сокращение сроков проведения анализов.

ООО “ППДП” создано в целях обеспечения нужд практического здравоохранения современными эффективными препаратами для диагностики гриппа и других ОРВИ. Препараты готовятся по оригинальным технологиям с использованием актуальных штаммов вирусов гриппа в соответствии с рекомендациями ВОЗ. Они безопасны в работе, т. к. не содержат инфекционного вируса. Лиофильно высушенные препараты длительно сохраняют свои диагностические свойства. ООО “ППДП” является отечественным производителем всего необходимого ассортимента иммунодиагностических препаратов, необходимых для надзора за гриппом и ОРВИ на территории России в рамках Глобальной системы надзора за гриппом ВОЗ.

Вся продукция производства ООО “ППДП” зарегистрирована в Федеральной службе по надзору в сфере здравоохранения (Росздравнадзоре) и допущена к обращению на территории РФ:

В 2016 г. ООО “ППДП” стала лауреатом Регионального конкурса “Лучший товар года”, в 2018 г. – лауреатом Национального экономического рейтинга в номинации “Лучшая компания России — 2018”.

Иммуноглобулины диагностические
флуоресцирующие гриппозные сухие

РУ № ФСР 2009/05255
от 09.07.2009 г.

Иммуноглобулин диагностический
флуоресцирующий аденовирусный
антигексоновый сухой

РУ № ФСР 2008/03940

Иммуноглобулины диагностические
флуоресцирующие парагриппозные сухие

РУ № ФСР 2009/05254

Иммуноглобулины диагностические
флуоресцирующие РС-вирусные сухие

РУ № ФСР 2009/05256

Диагностикумы гриппозные для реакции торможения гемагглютинации сухие

РУ № ФСР 2009/05253

Сыворотка диагностическая гриппозная для реакции торможения гемагглютинации сухая

РУ № ФСР 2009/05257

1. Карпова Л. С., Пелих М. Ю., Столяров К. А. и др. Пандемия гриппа в России как часть глобального распространения гриппа A (H1N1)pdm09 в 2009–2011 гг. Вопросы вирусологии. 2012, 57(6), 26-30.

2. Walter J. M., Wunderink R. G. Severe Respiratory Viral Infections: New Evidence and Changing Paradigms. Infect. Dis. Clin. North Am. 2017, 31(3): 455-74.

3. Blacksell S. D. Commercial dengue rapid diagnostic tests for point-of-care application: recent evaluations and future needs? J. Biomed. Biotechnol. 2012, 2012, 151967.

4. Wu G., Zaman M. H. Low-cost tools for diagnosing and monitoring HIV infection in low-resource settings. Bull. World Health Organ. 2012, 90(12), 914-20.

5. Грипп: эпидемиология, диагностика, лечение и профилактика / Под ред. акад. РАМН проф. О. И. Киселева, д-ра мед. Наук Л. М. Цыбаловой, акад. РАМН проф. В. И. Покровского. – М.: ООО “Издательство “Медицинское информационное агентство”, 2012. – 496 с.

6. Войцеховская Е. М., Вакин В. С., Васильева А. А. и др. Иммуногенность новой гриппозной вакцины. Лечащий врач. 2009; 10: 77-79.

7. WHO Global influenza surveillance Network. Manual for the laboratory diagnosis and virological surveillance of influenza. Geneva: World Health Organization; 2011. 139 p.

8. Spencer K. Recombinant viral proteins for use in diagnostic ELISAs to detect virus infection. Vaccine. 2007, 25, 5653-9.

Лабораторная дифференциальная диагностика гриппа и ОРВИ

В России ежегодно регистрируется около 50 миллионов случаев инфекционных заболеваний. До 95% из них приходится на острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ), включая грипп [1]. Помимо вирусов гриппа в структуре заболеваемости ОРВИ достаточно высока роль возбудителей иной этиологии, среди которых более чем в 20% случаев выявляются респираторно-синцитиальный вирус (РСВ), вирусы парагриппа и аденовирусы. Респираторные вирусы являются причиной 20% нозокомиальных пневмоний [2]. Экономический ущерб от ОРВИ можно сравнить лишь с затратами на профилактику и лечение длительно текущих сердечнососудистых и онкологических заболеваний. В связи с этим, ВОЗ разработала программу мониторинга и эпиднадзора за гриппом (Глобальная система надзора за гриппом), а также критерии для оценки эффективности диагностических тестов – это должны быть доступные, чувствительные, специфичные тесты, удобные для пользователя, быстродействующие и надежные, не требующие дорогостоящего оборудования [3, 4]. Эффективная профилактика и лечение инфекционных заболеваний также тесно связаны с ранним и точным выявлением патогена не только путем обнаружения инфекционных частиц в организме, но и путем определения профиля иммунного ответа и аспектов, которые придают устойчивость к терапии.

Применение современных гриппозных вакцин является одним из эффективных, безопасных и экономически оправданных способов профилактики гриппа среди населения. Своевременная вакцинация позволяет снизить заболеваемость гриппом в 1,4-1,7, уменьшает тяжесть болезни, предупреждает развитие тяжелых осложнений и летальных исходов [5].

Вакцинация против гриппа наиболее эффективна в случаях, когда циркулирующие вирусы соответствуют вирусам, содержащимся в вакцине. В связи с постоянным изменением вирусов гриппа сеть национальных центров по гриппу и сотрудничающих центров ВОЗ во всем мире ведут постоянный мониторинг вирусов гриппа, циркулирующими среди людей, и два раза в год обновляют состав противогриппозных вакцин. Эффективность гриппозных вакцин принято оценивать по приросту уровня специфических антител к гемагглютинину вирусов гриппа в парных сыворотках привитых лиц в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), которая основана на способности специфических антител ингибировать агглютинацию эритроцитов вирусами гриппа (рис. 1).

Рисунок 1. Результаты тестирования сывороток микрометодом РТГА.

Уровень антител к гемагглютинину напрямую коррелирует с уровнем защищенности. При оценке потенциальной эффективности вакцины титр антител не менее чем 1:40 считают защитным [6]. Для контроля вакцин, выбора оптимальной композиции, дозы и кратности вакцинации используют гриппозные диагностикумы для РТГА. В основу производства «Диагностикумов гриппозных для реакции торможения гемагглютинации сухих» (ДИГ) и «Сыворотки диагностической гриппозной для реакции торможения гемагглютинации сухой» (СДГ) положены многолетние научные разработки лаборатории биотехнологии диагностических препаратов ФГБУ «НИИ гриппа» МЗ РФ, который является одним из учредителей ООО «Предприятие по производству диагностических препаратов» (ООО «ППДП»).

В эпидемиологической практике ДИГ применяются для субтиповой серодиагностики гриппа (по 4-х кратному приросту титров антител в сыворотках реконвалесцентов) при расшифровке природы эпидемических вспышек. Систематическое проведение таких исследований позволяет определить стадию эпидемического процесса и соответствующую тактику проведения противоэпидемических мероприятий. СДГ используются для идентификации типов и субтипов вирусов гриппа А и В, выделенных из материалов от больных, изучения антигенной структуры вирусного гемагглютинина, контроля специфичности штаммов вирусов гриппа, входящих в состав вакцин.

Дифференциальная диагностика гриппа от ОРВИ необходима для осуществления эпидемиологического надзора за заболеваемостью и назначения своевременной противовирусной терапии, поскольку некоторые противовирусные препараты эффективны только на ранних стадиях инфекции. Понимание истинной причины заболевания также помогает избежать ненужного использования антибиотиков, которые часто назначают пациентам, инфицированным респираторными вирусами, и позволяет клиницистам прогнозировать возможные осложнения и иммунопатологические явления, которые могут возникнуть при этих инфекциях, а так же выявить группы риска.

ВОЗ рекомендует использовать для идентификации возбудителей острых респираторных вирусных инфекций метод флуоресцирующих антител (МФА) наряду с выделением вирусов в культуре клеток или полимеразной цепной реакцией [7]. МФА для определения вирусных антигенов отличается простотой, скоростью, низкой стоимостью и не уступает по чувствительности и специфичности современным вариантам иммуноферментного анализа [8] и наиболее эффективен в острой фазе (первые три дня) заболевания. Его результативность существенно зависит от правильности получения клинических материалов, скорости и условий доставки в лабораторию, а также качества используемых реагентов [9].

Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие сухие, выпускаемые ООО «ППДП», предназначены для быстрой (в течение 1,5-2-х часов) детекции вирусных антигенов в клинических материалах (мазки из носа, взятые от больных ОРВИ, содержащие клетки цилиндрического эпителия слизистой оболочки глубоких отделов носовой полости) или в клеточных культурах, инфицированных материалами от больных. Выпускаются препараты для ранней иммунофлуоресцентной диагностики вирусов гриппа А или В; аденовирусов или РСВ, вирусов парагриппа 1, 2 или 3 типа, вирусов герпеса 1 или 2 типов (рис. 2).

ООО «ППДП» постоянно повышает качество выпускаемой продукции за счет перехода от использования поликлональных сывороток к специфичным и чувствительным моноклональным антителам. Использование при конструировании диагностических тест-систем моноклональных антител обеспечивает высокую чувствительность и специфичность анализа, необходимый уровень стандартизации препаратов, а так же существенно облегчает интерпретацию результатов анализа.

Для выявления прироста антител в сыворотках реконвалесцентов, оценки коллективного иммунитета, оценки иммуногенности гриппозных вакцин, а так же в научных исследованиях широко используются иммуноферментные тест-системы для определения прироста уровня специфических антител класса IgG (ИФТС) к вирусам гриппа А (H1N1)pdm 09, А (H3N2), вирусам гриппа B обеих генетических линий (Викторианская и Ямагатская), аденовирусам, РСВ, вирусам парагриппа 1 и 3 типов в сыворотках людей, переболевших ОРВИ. Материалом для исследования служат парные сыворотки крови от больных ОРВИ, взятые в первые 5 дней болезни и через 14 – 30 суток от начала заболевания.

ИФТС представляет собой 13-компонентный набор, основными реагентами которого являются очищенные вирусные антигены, позитивные и негативные контрольные образцы сывороток, а также конъюгаты моноклональных антител к IgG человека.

Характерными особенностями ИФТС производства ООО «ППДП» являются:

  • высокая чувствительность анализа;
  • возможность использования микроколичеств сывороток (0,5 – 1 мкл);
  • снижение трудоемкости анализа за счет исключения операций титрования сывороток;
  • возможность индикации класс-специфических противовирусных антител;
  • сокращение сроков проведения анализов.

ООО «ППДП» создано в целях обеспечения нужд практического здравоохранения современными эффективными препаратами для диагностики гриппа и других ОРВИ. Препараты готовятся по оригинальным технологиям с использованием актуальных штаммов вирусов гриппа в соответствии с рекомендациями ВОЗ. Они безопасны в работе, т.к. не содержат инфекционного вируса. Лиофильно высушенные препараты длительно сохраняют свои диагностические свойства. ООО «ППДП» является отечественным производителем всего необходимого ассортимента иммунодиагностических препаратов, необходимых для надзора за гриппом и ОРВИ на территории России в рамках Глобальной системы надзора за гриппом ВОЗ.

Вся продукция производства ООО «ППДП» зарегистрирована в Федеральной службе по надзору в сфере здравоохранения (Росздравнадзоре) и допущена к обращению на территории РФ:

Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие гриппозные сухие

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector